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96T人氧化低密度脂蛋白ELISA 檢測試劑盒內(nèi)容及其配制
更新時間:2012-12-07   點擊次數(shù):1433次

 

 


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人氧化低密度脂蛋白ELISA 檢測試劑盒
試驗原理:
ox-LDL試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知ox-LDL濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將ox-LDL和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中ox-LDL的濃度呈比例關系。

 

自備材料
1. 蒸餾水。
2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

人氧化低密度脂蛋白ELISA 檢測試劑盒
操作注意事項
1. 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
2. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
3. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6. 洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7. 底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8. 加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
5、 保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

人氧化低密度脂蛋白ELISA 檢測試劑盒
操作步驟
1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空轉(zhuǎn)移趨化生長因子β1孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內(nèi)。
3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
4. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。


6號標準品以上的結果為非線性的,根據(jù)此標準曲線無法得到的結果。

試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
3. 重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

人氧化低密度脂蛋白ELISA 檢測試劑盒
結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的ox-LDL標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的ox-LDL含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍:0-400mmol/L

4、敏感度: 1.0 mmol/L

Cesium sulfate 硫酸銫 [10294-54-9] 100g
Cetylpyridinium chloride, monohydrate 氯化十六烷基吡啶一水 [6004-24-6] 100g
Cetylpyridinium chloride, monohydrate 氯化十六烷基吡啶一水 [6004-24-6] 500g
CHAPS 3-[3-(膽酰胺丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸 [75621-03-3] 1g
CHAPS 3-[3-(膽酰胺丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸 [75621-03-3] 5g
CHAPSO 3-[(3-膽固醇氨丙基)二甲基氨基]-2-羥基-1-丙磺酸 [82473-24-3] 1g
CHAPSO 3-[(3-膽固醇氨丙基)二甲基氨基]-2-羥基-1-丙磺酸 [82473-24-3] 5g
Chlorogenic acid 綠原酸 [327-97-9] 1g
4-Chloro-1-naphthol 4-氯-1-萘酚 [604-44-4] 10g
Charcoal active 狀 [7440-44-0] 1kg
Charcoal active 顆粒 [7440-44-0] 1kg
Chenodeoxycholic acid, free acid 鵝去氧膽酸 [474-25-9] 5g
CHES 2-環(huán)已胺基乙磺酸 [103-47-9] 250g
Poly-(1,4-b-D-glucopyranosamine Chitosan 殼聚糖 [9012-76-4] 100g
Poly-(1,4-b-D-glucopyranosamine Chitosan 殼聚糖 [9012-76-4] 500g
Chloral hydrate 水合氯醛 [302-17-0] 250g
Chloral 三氯乙醛 [75-87-6] 100ml
alpha-Chloralose α-葡萄糖縮氯醛 [15879-93-3] 100g
Chloramine T, trihydrate 氯銨-T三水 [7080-50-4] 500g
a-Chymotrypsin a-胰凝乳蛋白酶 / 250mg
trans-Cinnamaldehyde 肉桂醛 [14371-10-9] 250ml
Chloramphenicol 氯霉素 [56-75-7] 100g
Chlorhexidine diacetate salt hydrate 醋酸洗必泰 [56-95-1] 25g
2-Chloroacetamide 2-氯乙酰胺 [79-07-2] 50g


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